Método para la detección de la actividad dermonecrótica de cepas Bordetella pertussis en el modelo del ratón lactante

Resumen

La toxina dermonecrótica TD es un factor de virulencia de Bordetella pertussis, su actividad biológica estimula una cascada bioquímica que ocasiona lesiones necróticas y la muerte a animales de laboratorio. Este factor no está implicado en la generación de inmunidad protectora anti-pertúsica. En cambio, cepas mutantes del gen dnt son más seguras para formular vacunas vivas atenuadas y en el caso de las vacunas celulares y acelulares es mandatorio determinar la toxicidad residual debida a DNT en el ingrediente activo y la preparación antigénica final. En este trabajo, se estableció el modelo del ratón lactante para la evaluación de la actividad de la TD en B. pertussis. El extracto celular de B. pertussis se obtuvo mediante ultrasonicación de la suspensión celular. Mediante la determinación del contenido de proteínas en los extractos se demostró que el método de ruptura empleado produjo niveles de ruptura equivalentes entre diferentes cepas. La inoculación de ratones OF1 por vía intradérmica con el extracto de cepas de genotipo dnt salvaje produjo lesiones necróticas características y la muerte a las 24 h. En cambio, ratones similares inoculados con lisados celulares que contenían la TD inactivada por calor o con extractos de mutantes del gen dnt se mantuvieron vivos y sin lesiones necróticas. El biomodelo del ratón lactante pudiera ser empleado, bajo las condiciones señaladas, para la detección de la TD en extractos celulares de Bordetella pertussis.