Modificaciones genéticas en mutantes atoxigénicos de Vibrio cholerae O139 que mejoran sus propiedades como candidatos vacunales

Resumen

La hemaglutinina proteasa constituye un locus atractivo para la inserción
de genes heterólogos que permitan la identificación de candidatos vacunales
de Vibrio cholerae. Un mutante de Vibrio cholerae O139 previamente desprovisto de
los genes de CTXφ fue secuencialmente manipulado mediante técnicas de ingeniería
genética para obtener primero, derivados hapA::celA y después, clones con mejores
propiedades de bioseguridad mediante una mutación en el gen mshA. La primera de
las modificaciones consistió en la inserción del gen celA de Clostridium thermocellum
el cual permite, mediante una técnica microbiológica sencilla, la distinción inequívoca
del candidato vacunal de las cepas de Vibrio cholerae circulantes en la naturaleza. El
gen mshA codifica la subunidad fundamental de la hemaglutinina sensible a manosa,
fimbria que constituye el portal de entrada de varios vibrio-fagos, entre ellos VGJφ,
el cual es capaz de transportar los genes de la toxina colérica entre diferentes cepas
de Vibrio cholerae mediante un mecanismo de transducción especializada altamente
eficiente. La caracterización genética de los mutantes se realizó mediante Southern
blotting con sondas que reconocen específicamente los genes de interés. Los mutantes
así obtenidos mantuvieron el fenotipo de mótiles de sus parentales y un buen
nivel de colonización en el modelo del ratón neonato, aspectos esenciales para un
candidato vacunal.