Estudio de los genes VCA0260 y VCA0261 de Vibrio cholerae y de la proteína única que codifican

Resumen

La secuencia del genoma de Vibrio cholerae N16961 está depositada en
una base de datos del Instituto de Investigaciones del Genoma de E.U.A. (TIGR, por
sus siglas en inglés). En esa base de datos los genes VCA0260 y VCA0261 están anotados
como dos genes superpuestos e independientes que codifican para dos proteínas
hipotéticas de 11,9 kDa y 7,3 kDa, respectivamente. Previamente, en el laboratorio de
los autores, se realizó un estudio proteómico de la cepa de V. cholerae C7258 cultivada
en anaerobiosis. En ese trabajo se identificó una mancha de proteína sobre-expresada
en esas condiciones que contenía péptidos pertenecientes a las proteínas codificadas
por los genes VCA0260 y VCA0261. Este hallazgo sugirió que los genes VCA0260 y
VCA0261 constituían un único gen que codificaba una sola proteína. En el presente
trabajo se describe la amplificación por PCR, clonación y secuenciación de las regiones
de los ADN cromosómicos que comprenden a los genes VCA0260 y VCA0261 de las
cepas de V. cholerae N16961 y C7258. Se encontró que las secuencias nucleotídicas
de las regiones provenientes de ambas cepas son idénticas entre sí, y diferentes a
la publicada en el TIGR. La secuenciación reveló la presencia de un nucleótido de
guanina precediendo el codón de parada del gen VCA0261, no incluido en la secuencia
publicada en el TIGR. Esta guanina provoca un corrimiento del marco de lectura
del ORF (Open Reading Frame) VCA0261 al mismo del ORF VCA0260, generándose
un ORF más largo que contiene a los anteriores. Este nuevo ORF codifica para una
proteína de 18,7 kDa de peso molecular. La síntesis de esta proteína en Escherichia
coli, a partir de las regiones clonadas, se corroboró por espectrometría de masas. Así,
los genes VCA0261 y VCA0260 constituyen un único gen (VCA0261-VCA0260) que
codifica una proteína en V. cholerae. Por otro lado, la región del ADN cromosómico
que contiene a este gen se alecionó de la cepa de V. cholerae C7258, y el mutante así
obtenido se evaluó en cuanto a sensibilidad a CuSO4 en medio sólido. Se encontró que
el mutante era más sensible al cobre que la cepa parental, lo que sugirió que la proteína
codificada por el gen VCA0261-VCA0260 está relacionada con la homeostasis a este
ión en dicho microorganismo. Esta proteína, sin embargo, no parece ser importante
para la colonización de V. cholerae en presencia de 10 μmol/L de CuSO4.