Kinetic characterization of steroid 1,2-dehydrogenase from a new Mycobacterium sp mutant of industrial interest

Resumen

Se realizó un estudio cinético de la enzima esteroide 1,2-deshidrogenasa
con células enteras de la cepa 6323, la cual fue aislada por mutagénesis-UV a partir
de Ex4, mutante derivada de Mycobacterium NRRL-B3683, obtenida previamente
por mutagénesis-UV a partir de un aislado del suelo. La esteroide 1,2-deshidrogenasa
es una enzima clave para la biotransformación del sistema de anillos de estos compuestos,
la cual es esencial en el metabolismo microbiano de los esteroides. Con
anterioridad se ha demostrado que esta enzima es inducible y necesita de un aceptor
electrónico externo para la transferencia de electrones desde la enzima hasta el
oxígeno molecular, el aceptor final de los electrones liberados en la 1,2
deshidrogenación. Se determinaron las constantes cinéticas de Michaelis-Menten
(Kmapa) y Vmax.apa. Los valores obtenidos fueron 6,92 · 10-4 mol/L y 2,3 U/mg de
biomasa seca, respectivamente. Se estableció el efecto de la concentración de
biomasa y la concentración del azul de metileno empleado como aceptor electrónico
externo en la reacción enzimática. La actividad máxima se observó entre 5-10 mg/mLde
biomasa seca y 1,34 ·10-4 mol/L de azul de metileno. Los resultados obtenidos con azul
de metileno, claramente indican la necesidad del uso del aceptor en la 1,2
deshidrogenación de esteroides, como ha sido reportado anteriormente por otros autores.
Además se estudió el efecto del pH sobre la velocidad inicial de reacción, obteniéndose
la actividad máxima en el intervalo de 8,4-8,6. Los resultados del estudio confirman que
esta nueva cepa posee una actividad esteroide 1,2deshidrogenasa superior con relaci
ón a sus parentales. Esto se hace evidente de acuerdo con los parámetros cinéticos
obtenidos, los cuales son de gran interés desde el punto de vista industrial.