Separación de grandes cantidades de subunidades ribosomales de levadura por centrifugación zonal
Resumen
La centrifugación en rotor zonal es una metodología que brinda muchas ventajas para la purificación de macromoléculas, por su gran nivel de resolución aún para grandes cantidades de material. Para el estudio físico-químico de las macromoléculas que intervienen en la síntesis de proteínas en levadura, es necesario el aislamiento y purificación de subunidades ribosomales, para lo cual utilizamos un método de disociación en tampón fosfato 10mM y disminuyendo la concentración de iones magnesio hasta 0.1mM. La separación de 0.6 g de ribosomas se realizó en un gradiente hiperbólico. La resolución encontrada lleva a la conclusión de que la metodología empleada permite separar mayores cantidades. El rendimiento promedio fue de 65%. Las subunidades fueron caracterizadas teniendo menos de un 5% de contaminación cruzada, conservando su capacidad de reasociación a monosomas.
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