Generación de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales contra la proteína mayoritaria de la cápsida del fago VGJΦ de Vibrio cholerae

Resumen

El fago VGJΦ es un nuevo fago filamentoso de Vibrio cholerae descrito recientemente. Este fago fue aislado de la cepa
SG25-1 de V. cholerae O139 y es capaz de infectar la mayoría de las variantes (clásica, El Tor y O139) de este microorganismo. VGJΦ
utiliza como receptor un pelo tipo IV denominado hemaglutinina sensible a manosa para infectar a V. cholerae. Una vez dentro de
los vibriones, VGJΦ puede recombinarse con el fago CTXΦ (fago portador de los genes que codifican para la toxina colérica) para
formar el fago hibrido HybPΦ, que puede ser exportado por los vibriones e infectar otras cepas de este microorganismo con la posibilidad
de que se introduzcan los genes de la toxina del cólera en una cepa no patogénica de V. cholerae y la convierta en patogénica.
Todo lo anterior, hizo necesario la obtención de anticuerpos monoclonales contra este nuevo fago para su estudio y caracterización.
El antígeno utilizado para la obtención de ratones BALB/c con elevados títulos de anticuerpos específicos en suero fue la proteína
mayoritaria de la cápsida del fago VGJΦ. En la generación de los hibridomas se emplearon procedimientos estándar de fusión celular.
Los análisis primarios y secundarios de los híbridos generados se realizaron mediante la técnica de inmunoensayo de enzima
ligada (ELISA), mientras que la caracterización de los anticuerpos monoclonales obtenidos se hicieron utilizando las técnicas de
Dot Blot, Western Blot y ELISA. También se obtuvo fluido ascítico en ratones BALB/c para producir los anticuerpos monoclonales,
los cuales se purificaron mediante Cromatografía de Afinidad. Este es el primer reporte en el que se describe la producción de un
anticuerpo específico contra el fago VGJΦ de V. cholerae.