Expresión heteróloga de la proteína OmpU de Vibrio cholerae y su purificación por cromatografía de afinidad a iones metálicos inmovilizados

Resumen

OmpU es una proteína integral de membrana de la familia de las porinas que se ubica en la envoltura externa
de las bacterias del género Vibrio. Este manuscrito describe la obtención de un plásmido recombinante para expresar la
proteína OmpU fusionada a un dominio c-terminal myc-hexahistidina (myc-hexa-his) de 2 kDa. La proteína recombinante
resultante OmpU-myc-hexa-his codificada en el plásmido se expresa en la cepa Escherichia coli Top 10, acumulándose en
forma insoluble en el interior celular. La recuperación de la proteína a partir de los cuerpos de inclusión insolubles se realiza
en urea 7 mol/L. La forma desnaturalizada se purificó por cromatografía de afinidad a iones metálicos inmovilizados. El
análisis por SDS-PAGE de las fracciones purificadas detectó una proteína de aproximadamente 40 kDa, en correspondencia
con la masa molecular reportada para el monómero natural de OmpU (38 kDa) en Vibrio cholerae y el dominio c-terminal
acoplado. La proteína recombinante obtenida reaccionó en inmunoblot con los anticuerpos monoclonales anti-OmpU y
anti-hexa-his. La detección de la misma banda con estos dos anticuerpos indica la coexistencia de la proteína OmpU y el
epitopo hexa-histidina en una misma especie. En las condiciones de estudio empleadas, la proteína se obtuvo en un solo
paso cromatográfico, resultado del cual el grado de pureza se incrementó hasta el 90 %; con un rendimiento del 23 %. Se
dispone ahora del sistema vector hospedero necesario para expresar la proteína.