El polimorfismo conformacional de simple cadena en la caracterización del VHC

Resumen

La infección por el virus de la hepatitis C constituye hoy un problema de salud en el mundo. En Cuba aproximadamente el 1 % de la
población es seropositiva y se estima, por la práctica internacional, que en un 80 % de los infectados la enfermedad se hace crónica y de estos un 20 % desarrolla cirrosis hepática. Se ha planteado que el curso de la enfermedad guarda estrecha relación con la variante genómica del virus. De ahí, la importancia de contar con un método sencillo para caracterizar molecularmente las diferentes variantes genómicas en cada caso. En el presente trabajo se estableció una metodología sencilla en pacientes cubanos que facilita este estudio para el virus de la hepatitis C. Se optimizó el secuenciamiento directo de los productos de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del ADN complementario de la región 5' no traducida (5'NT) del virus y debido a la baja heterogeneidad encontrada en las muestras estudiadas y a la imposibilidad de detectar coinfección, se desarrolló una técnica más sencilla y rápida de búsqueda de variantes del genoma viral: se describe un método no radiactivo para el estudio del Polimorfismo Conformacional de Simple Cadena de los productos de la PCR que permite, mediante tinción con nitrato de plata, obtener una visualización directa
y muy sensible del producto desnaturalizado de la PCR en gel no desnaturalizante de poliacrilamida. Se demuestra como cadenas simples de una misma longitud se separan por diferencias en sus secuencias. En particular, se muestra como se separan las dos cadenas complementarias del fragmento de ADN y como se diferencian cadenas con un solo cambio de base.