Two-stage screening of combinatorial peptide libraries. Application to bovine serum albumin ligand selection

Resumen

Los péptidos cortos son excelentes ligandos para cromatografía de afinidad. El método dividir-acoplar-recombinar permite obtener bibliotecas peptídicas con todas las combinaciones de los aminoácidos en la forma de “una bolilla-un péptido”. En este trabajo, se diseñó un método de doble screening de bibliotecas para seleccionar ligandos peptídicos. El primer screening de la biblioteca se realizó con la proteína blanco (seroalbúmina bovina, BSA) marcada con Texas Red. Las bolillas fluorescentes se aislaron en forma automática utilizando el equipo Complex Object Parametric Analyzer and Sorter (COPAS). Las bolillas aisladas se lavaron y sometieron a un segundo screening realizado con BSA marcada con biotina y con estreptavidina-peroxidasa y las bolillas se revelaron con 3,3'-diaminobencidina. Los péptidos presentes en las bolillas aisladas se secuenciaron por espectrometría de masas. Se sintetizaron los péptidos obtenidos con mayor frecuencia y se acoplaron a agarosa. Las matrices adsorbieron la BSA y no adsorbieron el Texas-Red ni la estreptavidina-peroxidasa. La BSA es el principal contaminante en los sobrenadantes de cultivo cuando se produce rhEPO en células CHO. Con la intención de utilizar estas matrices para la remoción de la BSA de dichos sobrenadantes, se ensayó además, la adsorción de rhEPO pura a las matrices, la cual no fue retenida en ninguno de los casos.