Two-stage screening of combinatorial peptide libraries. Application to bovine serum albumin ligand selection
Keywords:
combinatorial libraries, peptides, affinity, solid phaseAbstract
Short peptides are excellent ligands for affinity chromatrography. Divide-couple-recombine method allows obtaining a peptide library with all possible combinations of the amino acids in the form of "one bead-one peptide". It was designed a two-stage library screening method for peptide ligands selection in this work. The library screening was performed with the target protein (bovine seroalbumin, BSA) coupled to Texas Red. Fluorescent beads were automatically isolated using the Complex Object Parametric Analyzer and Sorter (COPAS) equipment. Isolated beads were washed. The second screening was performed with BSA coupled to biotin and with streptavidin-peroxidase and revealed with 3,3'-diaminobenzidine. Peptides from isolated beads were sequenced using a mass spectrometry analyzer. Those peptides appearing with more frequency were synthesized and immobilized on agarose. All peptides adsorbed BSA but not Texas-Red nor streptavidin-peroxidase. As BSA from fetal bovine serum is the main contaminant, when expressing rhEPO in CHO cell culture, it was studied rhEPO adsorption on these matrices for their future application in BSA removal from cell cultures. When a pure sample of rhEPO was loaded on peptide-agarose columns, all rhEPO passed through.Downloads
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