Obtención de un conjugado anti IgG de ratón - FITC mediante la tecnología IgY para uso como anticuerpo secundario en la detección de antígenos de superficie celular

Resumen

Desde el año 1996, el Centro Europeo para la Validación de Métodos
Alternativos recomendó el uso de la IgY como sustituto de la IgG de mamíferos
con el objetivo de reducir al mínimo las situaciones de daño que se les causa a
los animales que se someten a la producción de anticuerpos (Acs). En 1999, la
tecnología IgY se aprobó por la Oficina Federal Veterinaria del gobierno suizo
como un método alternativo para sustentar el cuidado y bienestar de los animales.
Muchas de las publicaciones relacionadas con IgY demuestran las características
desde el punto de vista bioquímico de esta inmunoglobulina que la hace
tomar ventajas sobre la IgG, entre las que refiere que los complejos inmunes
que contienen Acs aviares, no pueden interactuar con los receptores Fc o del
complemento sobre las células, por lo que el reemplazamiento de los Acs de
mamíferos por sus similares en gallinas pudieran evitar interferencias en muchos
ensayos diagnósticos. Este conocimiento ha sido la base objetiva de este
trabajo que consistió en la obtención de Acs IgY anti IgG de ratón con elevado
grado de pureza, los que fueron conjugados por unión covalente vía grupos amino
primarios libres al isotiocianato de fluoresceína (FITC). Estos conjugados mostraron
poseer una razón molar FITC/proteína en intervalos reportados para un
buen desempeño. La dilución óptima de trabajo obtenida para ellos fue muy
adecuada y demostró su utilidad como Acs secundarios en el conteo de antígenos
de superficie celular linfocitario humano por sus resultados comparables con
los reactivos similares de origen mamífero ensayados en paralelo.