Diseño de un procedimiento para la obtención y caracterización de disoluciones de Hemo purificadas

Resumen

Los productos que contienen hierro en forma de hemo (PM-616 Da), son útiles para el tratamiento y prevención de la anemia. El objetivo de este trabajo fue diseñar un método para obtener una disolución de hemo, separar sus fracciones y caracterizarla con técnicas espectroscópicas. Esta disolución, se obtuvo a partir de sangre bovina estéril, utilizando métodos físicos y químicos. Para separar por tamaño las moléculas que la componen, se utilizaron membranas de diálisis de 1 000 Da, 6-8000 Da y 15 000 Da y tubos de centrífuga Amicón con membrana de 10 000 Da. Se emplearon dos lotes ajustados a pH-4,4 y 5,0 respectivamente. La disolución dializada se trató con HNO3 86 % y se concentró para determinar hierro (Fe) por Absorción atómica AA. La diálisis se realizó con 2 L de agua destilada y se concentró por calor, tratándose igualmente con HNO3. La pureza se determinó por espectrometría de masa (EM) empleándose como patrón la hematina porcina (PM - 633,49 Da, Sigma). Como resultado, el hidrolizado a pH - 4,4 obtuvo un 82,32 % de moléculas menores de 1 000 Da, 2,72 % entre 1 000 y 6 - 8 000 Da, 4,24 % entre 6 - 8 000 y 15 000 Da, y 10,72 % por encima de 15 000 Da. Esta última fracción se atribuye a agregados que pudiera presentar el hemo en forma monomérica. En conclusión, se obtuvo una disolución de hemo asociado a péptidos, menores de 1 000 Da con alto grado de pureza demostrado por EM.