Determinación de la constante de afinidad para anticuerpos monoclonales mediante un método inmunoenzimático empleando la tecnología SUMA

Resumen

Se determinó la constante de afinidad (Kaf) de seis anticuerpos monoclonales: anti ß-GCH (4G1-C5); anti T4 (F8-B9); anti IgE (IgE1 e IgE2); anti HBsAg (Hep-1, 3F1-F3) con el empleo de un método inmunoenzimático adaptado para el sistema ultramicroanalítico (SUMA). Este método emplea placas de reacción de poliestireno con pocillos que requieren de volúmenes muy pequeños, tanto de muestra como de reactivos, del orden de 10 μL y conjugados enzimáticos cuyos sustratos fluorigénicos posibilitan incrementar la sensibilidad de las mediciones. La lectura, procesamiento y almacenamiento de los resultados se realizan automáticamente en un tiempo breve. Las placas de ultramicroELISA sensibilizadas con varias concentraciones de cada antígeno se incubaron con el anticuerpo monoclonal correspondiente, con la adición posterior de conjugado anti-IgG murina/Fosfatasa Alcalina y se reveló la reacción con un sustrato fluorigénico (4-metilumbeliferilfosfato). La concentración que corresponde al 50 % de la fluorescencia en cada una de las curvas sigmoides obtenidas para cada anticuerpo se empleó para el cálculo de la Kaf según la fórmula:Kaf= (n-1)/2 (n[Ab']t - [Ab]t) donde: n = [Ag]t/[Ag']t. Los resultados obtenidos demostraron que los seis anticuerpos mono-clonales ensayados tienen una alta afinidad por sus ligandos con valores que oscilaron entre 108 y 109 L/mol. Este método es rápido, reproducible y de fácil ejecución y manipulación.